Η επίδραση της τιμής του pH και της θερμοκρασίας της πυρρολιδόνης στο υδατικό διάλυμα PVP παίζει ρόλο στη διατήρηση των σπόρων των κυττάρων. Η σωστή λειτουργία και οι κατάλληλες συνθήκες κατάψυξης μπορούν να μειώσουν την αλλαγή ή την απώλεια των χαρακτηριστικών της κυψέλης. Το διάλυμα PVP με μη διασταυρούμενη σύνδεση δεν έχει ιδιαίτερη θιξοτροπία, εκτός εάν είναι θιξοτροπικό σε υψηλή συγκέντρωση και παρουσιάζει πολύ σύντομο χρόνο χαλάρωσης. Εμπειρία στην κατάψυξη κυττάρων: Η επιλογή του σωστού εργαλείου κατάψυξης είναι ο καλύτερος τρόπος. Η κατάψυξη κυττάρων είναι μια τεχνολογία που αποθηκεύει τα κύτταρα σε περιβάλλον χαμηλής θερμοκρασίας, μειώνει τον μεταβολισμό των κυττάρων και επιτυγχάνει μακροχρόνια αποθήκευση. (Πυρρολιδόνη) Στις περισσότερες κυτταρικές σειρές, η απόδοση πάχυνσης του PVP σχετίζεται στενά με τη σχετική μοριακή του μάζα. Υπό δεδομένες συνθήκες συγκέντρωσης, όσο μεγαλύτερη είναι η σχετική μοριακή μάζα, τόσο μεγαλύτερο είναι το ιξώδες της. Τα κύτταρα θα συνεχίσουν να συσσωρεύονται και να αλλάζουν με τη γήρανση και την εξέλιξη, προκαλώντας «πολιτιστική μετατόπιση» φαινοτύπου και γονότυπου. Η σωστή και επιτυχής κατάψυξη παίζει σημαντικό ρόλο στη μακροχρόνια εφαρμογή των κυττάρων.
Κατά τη διαδικασία κατάψυξης, επομένως, σωστή καλλιέργεια και ήπια συλλογή κυττάρων, πριν από την κατάψυξη, τα κύτταρα θα πρέπει να διατηρούν την καλύτερη κατάσταση ανάπτυξης (στη λογαριθμική ή εκθετική φάση). Ιδανικά, το μέσο καλλιέργειας θα πρέπει να αντικαθίσταται 24 ώρες πριν από τη συγκομιδή. Συνιστάται να ελέγχετε την καλλιέργεια για μικροβιακές προσμείξεις, ιδιαίτερα μυκόπλασμα, για να βεβαιωθείτε ότι τα κύτταρα δεν είναι μολυσμένα. Κατά τη διαδικασία συλλογής κυττάρων, η πειραματική λειτουργία πρέπει να είναι όσο το δυνατόν πιο ήπια για να αποφευχθεί η κυτταρική βλάβη. (Πυρρολιδόνη) Κατάλληλο κρυοπροστατευτικό. Επί του παρόντος, η κοινώς χρησιμοποιούμενη τεχνολογία για την κατάψυξη κυττάρων είναι η κρυοσυντήρηση υγρού αζώτου, η οποία χρησιμοποιεί κυρίως τη μέθοδο αργής κατάψυξης με κατάλληλη ποσότητα προστατευτικού παράγοντα για την κατάψυξη των κυττάρων και τη μείωση της βλάβης στα κύτταρα κατά τη διαδικασία κατάψυξης. Εάν τα κύτταρα καταψύχονται απευθείας χωρίς προστατευτικό παράγοντα, το νερό μέσα και έξω από τα κύτταρα θα σχηματίσει γρήγορα κρυστάλλους πάγου, προκαλώντας μια σειρά από ανεπιθύμητες αντιδράσεις.
Η πολυβινυλοπυρρολιδόνη, η αιθυλενογλυκόλη, η μεθανόλη και το μεθυλακεταμίδιο είναι όλα κρυοπροστατευτικά. Το διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) και η γλυκερόλη είναι κοινά στην κρυοσυντήρηση των κυττάρων. Αυτές οι δύο ουσίες έχουν μικρό μοριακό βάρος, υψηλή διαλυτότητα και μπορούν εύκολα να διεισδύσουν στα κύτταρα. Μπορούν να μειώσουν το σημείο πήξης και να αυξήσουν τη διαπερατότητα των κυτταρικών μεμβρανών στο νερό. Το κλειδί βρίσκεται στην κυτταρική φύση. (Πυρρολιδόνη) Το DMSO έχει συνήθως συγκέντρωση 5-10% (v/v) και η βέλτιστη συγκέντρωση ποικίλλει ανάλογα με τις διαφορετικές κυτταρικές σειρές. Η τελική συγκέντρωση γλυκερίνης στο μέσο κατάψυξης είναι 5-15%. Ομοίως, η βέλτιστη συγκέντρωση εξαρτάται από την κυτταρική σειρά. Για να αυξήσετε το ποσοστό επιβίωσης των κυττάρων που είναι δύσκολο να διατηρηθούν, μπορείτε να επιλέξετε να αυξήσετε τη συγκέντρωση ορού στο διάλυμα συντήρησης κατά τη διάρκεια της κρυοσυντήρησης. Εάν θέλετε να παγώσετε τα κύτταρα πιο γρήγορα και πιο σταθερά, η λύση κατάψυξης κυττάρων θα ήταν μια καλή επιλογή. Δεν απαιτείται προετοιμασία. Απλώς προσθέστε μια κατάλληλη ποσότητα διαλύματος κατάψυξης στα κύτταρα. Η επέμβαση είναι απλή και μπορείτε να έχετε κύτταρα με υψηλή βιωσιμότητα.
